凝胶净化色谱又称体积排除色谱或凝胶渗透色谱，是一种以多孔凝胶为固定相的液相色谱分离技术，其核心机理是利用凝胶孔道的空间尺寸效应实现不同大小分子的分离。当样品随流动相进入色谱柱后，大分子因体积较大只能渗入少量大孔，在固定相中经历的路径较短，因而先流出；小分子可进入更多微孔，保留时间更长，后流出。所有孔隙都无法进入的大分子则在死体积处流出。因此，溶质按分子体积从大到小依次洗脱。该过程中固定相表面与溶质分子间不存在化学相互作用，流动相仅起溶解样品的作用，属于非吸附性分离机制。
凝胶填料选型的关键影响因素主要包括以下几方面：
第一，分离范围与排阻极限。每种凝胶填料都有特定的分离范围，只有分子量处于该区间内时才能达到理想分离效果。选型时应根据目标物与杂质的分子量差异，选择排阻极限略大于样品中最高分子量物质的凝胶。若目标小分子需要保留、大分子杂质需快速流出，则应选择孔径较小的填料，使大分子难以进入孔道。
第二，填料基材与机械强度。常用凝胶介质包括葡聚糖凝胶、琼脂糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶及聚苯乙烯-二乙烯基苯共聚物等。软胶如葡聚糖凝胶机械强度较低，适合低压操作；刚性填料如硅胶或多孔玻璃则可在高压条件下使用，且无需预先溶胀，便于更换洗脱液。
第三，流动相兼容性。以有机溶剂为流动相的凝胶渗透色谱应用较多，常用氯仿、甲苯等非极性有机溶剂。选型时需考虑填料与流动相的化学兼容性，确保填料不溶胀、不降解。
第四，柱效与稳定性。填料的孔径分布直接影响柱效，孔径分布越窄，分离选择性越好。此外，填料的化学惰性和热稳定性也是重要考量因素，需确保在长期使用中性能稳定。
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更新时间：2026-09-11
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